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简体中文液相色谱柱的验收，维护和保养
分析仪器是药物的研发、临床试验到质量控制的重要工具和手段，液相色谱分析是众多仪器分析方法中的重中之重。液相色谱柱在色谱分析系统中主要起着核心分离作用，如同色谱系统的心脏，同时也是易损耗品。为了减少损耗，液相色谱柱的验收,维护和保养是每个色谱分析实验室必须建立的管理制度，同时也是从业人员需要积累和修炼的基本技能。
本文主要针对液相色谱柱使用过程常用问题进行探讨。
色谱柱的连接
色谱柱安装应按照同一个方向连接使用，且需要按照色谱柱上的方向指示连接，尽量避免色谱柱反向连接！
▶ 安装色谱柱时管线伸出接头长度过长，使得螺纹拧入较浅，会导致密封性不好而漏液，进一步引起基线漂移或响应降低；
▶ 安装色谱柱时管线伸出接头长度过短，会在管线前段出现死体积，引起峰形展宽，灵敏度降低。
※ 理想的接头连接应具备以下特性：
▶ 管线与接口之间无死体积；
▶ 在超高压和高温下始终避免泄漏；
▶ 优异的长期使用稳定性，防止管线滑动；
▶ 简便易用。
选择合适的接头☟
※ 管线的选择:
分析型液相系统最常用的规格是0.12和0.17mm内径的管线。更换管线时首先要确认当前管线的规格、并更换相同内径和长度的管线，否则会造成更换前后结果的不一致，因为管线体积会影响系统柱外体积，从而影响峰形和保留时间。
反相柱活化平衡
首先，使用甲醇或乙腈冲洗约20 倍柱体积 。
柱体积计算☟
若流动相含有缓冲盐，使用与流动相中初始比例相等比例的超纯水和有机相冲洗过渡约20 倍柱体积，再用含缓冲盐的流动相平衡冲洗约20 倍柱体积或以上。
若流动相不含缓冲盐，可直接用流动相平衡色谱柱，大约20 倍柱体积或以上。
当基线和压力平稳后测试，判断是否充分平衡以连续进样结果的重现为准。若不够可延长流动相的平衡时间。
反相柱冲洗保存
使用50:50 甲醇或乙腈与水的混合溶液冲洗20-30 倍的柱体积；
使用纯甲醇或乙腈冲洗20-30倍柱体积；
储存之前将堵头紧紧密封在柱端接头上，以免填料变干。
反相色谱柱清洗再生
色谱柱在使用过程中因为样品或者流动相带来物理颗粒或者化学吸附，引起色谱柱的污染，这时会在色谱图上有明显的变化。出现色谱柱污染时，清洗或反冲清洗则需要根据色谱柱的特性进行操作。清洗或反冲清洗反相色谱柱时，用以下溶剂至少各30倍柱体积冲洗。
例如：柱污染导致的峰分叉
断开色谱柱与检测器的连接，将管线留在色谱柱末端，将其放入接收液体的烧杯中，先用不含缓冲液盐的流动相冲洗（水/有机相），然后用 100% 有机相（甲醇和乙腈）冲洗，检查压力是否回归正常，如果没有，再进行下一步操作。如压力没有回归正常，丢弃色谱柱或考虑用更强的条件清洗：75% 乙腈/25% 异丙醇、100% 异丙醇、100% 二氯甲烷 、100% 己烷。值得注意的是，无论是使用己烷还是二氯甲烷，使用之前或恢复使用反相流动相之前必须用异丙醇进行冲洗。
虽然色谱柱不应轻易反冲，但当明确知道超压来自颗粒物堵塞筛板或柱头污染时，反冲是最有效补救方法。反冲色谱柱可使颗粒物快速被冲出，此外还可快速冲出柱头强吸附污染物，柱子反冲后最好仍然正向连接使用。不过，反冲也会带来负面影响，如可能导致柱床松动、发生保留时间改变、小粒径的色谱柱反冲可能导致填料流出等。
▶ 可以反冲的色谱柱有：粒径大于2um的色谱柱（2.7、3、3.5、4、5μm等）；
▶ 不可反冲的色谱柱有：粒径小于2um的色谱柱（1.8μm RRHD/RRHT；1.9μm Poroshell）。
液相色谱柱使用过程中最常见的问题包括pH值、温度、溶剂耐受、压力、样品等。色谱柱使用条件不得超出厂家建议的范围，包括最高压力，pH范围，水相耐受，柱温等。当测试条件接近色谱柱使用范围的极限值时，柱寿命会受影响。
超范围使用C18柱，拖尾-永久破坏
根据pH选择合适的色谱柱（以Poroshell 120系列为例)
色谱柱是有生命周期的色谱分析关键耗材。为了保障色谱柱的正确使用，提高每一根色谱柱的产出，实验室需要给每根色谱柱建立档案，对其从购入到每次使用情况进行真实的记录，保障规范使用，同时为质量管理体系建设提供原始的资料。
色谱柱的档案的记录要点和参考表格如下，实验室可以根据项目特点进行优化：
信息来源：以上内容来源于安捷伦技术报告整理而成
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关于我们：
北京新领先医药科技发展有限公司分析测试中心拥有一千平米的专业实验室，配备药物分析领域的各种高端仪器设备40余台，主要包括电感耦合等离子体质谱仪（ICP-MS）、液质联用仪（LC-MS/MS）、气质联用仪（GC-MS/MS和GC-MS）、离子色谱仪（IC）、差示扫描量热仪（DSC）、红外光谱（IR）、高效液相色谱（HPLC，配备电喷雾检测器CAD）和气相色谱仪（GC）等。该中心不仅通过了ISO9001质量管理体系认证，并且即将获得CNAS认可资质。检测数据采集和处理系统均具备网络版审计追踪功能，可为广大客户提供安全、准确、可靠和可追溯的检测数据和结果。
该中心不仅研发技术团队高度专业化，检测技术和药物研发经验丰富，而且有非常强大的业界知名专家组成的顾问团队，以及与岛津和赛默飞仪器公司建立的联合实验室，可以使用世界上最先进的仪器设备，为药物研发企业提供专业、精准、快速的检测技术服务。
该中心的主要业务范围包括：符合国家药政法规的药物全生命周期质量研究、遗传毒性杂质检测、痕量残留物分析、元素杂质检测、药品接触系统相容性研究（药包材、生产组件和给药装置等）、抗生素类药物聚合物杂质研究、未知杂质结构解析、难获得杂质质谱研究，以及使用Derek和Sarah软件对含有遗传毒性警示结构的杂质进行毒性预测等多个检测技术领域。其中，聚合物杂质研究和难获得杂质质谱检测为业界首创技术，可为药物研发过程中的难点和痛点问题提供强有力的技术支持。
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