案例剖析 || 多种药物中痕量杂质的检测模式，值得收藏！

发布时间：2021-03-04

众所周知，药物中限度低的杂质特别是遗传毒性杂质一般以痕量形式存在，对分离检测技术提出了很大的挑战。同时，药物本身的理化性质如溶解度或与杂质发生化学反应等原因，常常导致方法的开发和验证会遇到很大的困难，需要我们在样品前处理和检测设备的选择上开动脑筋。

下面是我们在检测实践中遇到的一些经典案例，在此与大家分享。这些案例不仅说明了前处理的重要性，也从侧面反映出有机合成背景对于解决检测难题的必要性。

柱前衍生化法解决氯乙酸检测灵敏度低的问题

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检测物质：氯乙酸

检测难点：氯乙酸是在很多药物中存在的遗传毒性杂质，其限度往往低于5ppm，正因为如此，只能考虑用灵敏度高的质谱法进行检测。但是，经过方法摸索，发现其在液质和气质上均无很好的响应，无法达到检测灵敏度的要求。

解决方案：由于醛类或酮类物质可与苯肼反应生成苯腙，使得在高效液相上检测的灵敏度大大提高。我们利用类似的反应机理，将氯乙酸与2-硝基苯肼进行柱前衍生化，以提高检测灵敏度。但是，由于氯乙酸的羧基与苯肼反应的活性较差，我们加入了适当的催化剂，生成了在392nm波长处有吸收的衍生物，可以用HPLC进行检测。该方法操作简单，且衍生物可与极性相近的药物主成分有效分离，有效解决了氯乙酸难以检测这一难题。

检测水解中间体解决硫酸二甲酯不稳定问题

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硫酸二甲酯是重要的化工原料，常作为甲基化试剂用于有机合成领域。因其含有遗传毒性杂质警示结构，在ICH M7中归属为3类基因毒性杂质，可能成为引发癌症的诱因，因此，能够检测药物中残留的硫酸二甲酯对于控制临床用药的安全性具有非常重要的意义。

检测物质：硫酸二甲酯

检测难点：硫酸二甲酯常温下在水中不稳定，易水解为硫酸单甲酯。

解决方案：用离子色谱对硫酸单甲酯进行检测，即可达到准确测定硫酸二甲酯的目的。该方法前处理简单，定量准确，灵敏度、精密度和回收率均良好。

保护活性基团解决检测回收率低的问题

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检测物质：氨基磺酸甲酯

检测难点：检测某个药物中的遗传毒性杂质氨基磺酸甲酯时，发现回收率很低，无法达到方法验证的要求。

解决方案：通过原因分析发现，氨基磺酸甲酯是工业上常用的甲基化试剂，可与药物中的氨基进行甲基化反应，从而导致回收率极低的后果。因此，我们在向药物加标之前，先用稀甲酸与药物中的氨基反应，将与氨基磺酸甲酯反应的活性基团保护起来，这样就用简单的办法解决了回收率不合格问题。

两相萃取法解决离子检测时药物的溶解性问题

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检测物质：氯离子

检测难点：用离子色谱法检测某个药物中的氯离子以确定其与盐酸的成盐率时，发现药物主成分完全不溶于稀氢氧化钠水溶液，导致氯离子的检测无法进行。

解决方案：根据该药物的结构，我们判定其有机结构部分应溶于乙酸乙酯，而盐酸部分应溶解在氢氧化钠溶液中形成游离氯离子，因此，将该药物溶解在50:50的有机相和水相中，再取水相进行离子色谱检测，轻松解决了由于药物溶解度问题而导致的检测难题。

多种检测模式自由切换…总有一款适合你

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检测物质：乙酰溴

检测难点：起初使用气质法对残留试剂乙酰溴直接进行检测，但是灵敏度不达要求。考虑到乙酰溴极易水解，水解后可以检测生成的乙酸，即可达到定量检测乙酰溴的目的。但是，通过尝试我们发现，因乙酰溴为遗传毒性杂质，其限度很低，即使使用高端仪器仍无法解决乙酸检测灵敏度低的问题。

解决方案：乙酰溴水解后除生成乙酸外，还有等摩尔数的溴离子生成，那用离子色谱法究竟可不可行？实践证明，用离子色谱法检测水解后生成的溴离子，具有操作简单、灵敏度高、重现性好、回收率稳定等优点。

结语

综上，我们仅仅提供了在检测实践中遇到问题的解决思路，由于药物种类繁多，杂质特性多种多样，加之药物主成分对检测的干扰，需要我们具体问题具体分析。原则上，只要我们开动脑筋，所有杂质均应有办法进行检测，但前提是对杂质和药物主成分的性质要有深刻了解，熟悉有机化学反应和机理，熟悉所用仪器设备的性能，可在多种检测模式进行自由切换，终能达到为每个杂质建立合适检测方法的目标。

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